Identification of ultrastructural and functional damages in sperm from six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) due to cryopreservation / Identificação de danos ultraestruturais e funcionais em espermatozoides de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) oriundos da criopreservação

The aim of the study was to cryopreserve the semen of six-banded armadillos (Euphractus sexcinctus) in Tris-yolk and glycerol diluent, and to determine the damage caused by the freezing-thawing process, using fluorescent markers and ultrastructural analysis. Semen samples (n=11) collected from 4 adult six-banded armadillos by electroejaculation were cryopreserved in Tris diluent plus 20% egg yolk and 3% glycerol, in a fast freezing curve. Classical analysis of samples was performed after dilution, refrigeration and thawing, followed by fluorescence analysis, using a combination of fluorescent probes to assess membrane integrity (propidium iodide - PI and Hoechst - H342), and mitochondrial activity (CMXRos - Mito Tracker Red®). We also used the ultrastructural analysis to verify possible morphological alterations caused by cryoinjuries. When compared with fresh samples, we verified a significant decline in all the armadillos' semen parameters after thawing, in which only 6.1% motile sperm were found. However, the percentage of sperm which remained with viable (13%) and functional (24.7%) membranes after thawing suggests that some cells could be live but immotile. Analysis using fluorescent markers revealed that the mitochondria of armadillos' sperm is highly sensible to the freezing protocol and the findings through ultrastructure analysis proved this statement. Additionally, the images obtained by transmission electron microscopy revealed that frozen-thawed sperm presented damaged plasma membrane, nuclear modifications as changes in chromatin and acrossomal changes relative to sperm capacitation. In conclusion, this study is the first attempt to cryopreserve the semen of an armadillo species, and to help us to identify critical points on the freezing-thawing procedure in order to improve the protocol.(AU)

O objetivo deste estudo foi criopreservar o sêmen de tatus-peba (Euphractus sexcinctus) em diluente Tris-gema e glicerol, e determinar os danos causados pelo processo de congelação-descongelação, utilizando marcadores fluorescentes e análise ultraestrutural. As amostras de sêmen (n=11) coletadas de 4 tatus-peba adultos por eletroejaculação foram criopreservadas em diluente Tris acrescido de 20% de gema de ovo e 3% de glicerol, em curva rápida de congelação. A análise clássica das amostras foi realizada após a diluição, refrigeração e descongelação, seguida por análise de fluorescência, utilizando uma combinação de sondas fluorescentes para avaliar a integridade da membrana (Iodeto de Propídio - PI e Hoechst - H342), e a atividade mitocondrial (CMXRos - Mito Tracker RED®). Foi também utilizada a análise ultraestrutural para verificar possíveis alterações morfológicas causadas pela crioinjúria. Quando comparadas com as amostras a fresco, verificou-se uma queda significativa em todos os parâmetros seminais dos tatus após a descongelação, em que apenas 6,1% de espermatozoides móveis foram encontrados. No entanto, o percentual de espermatozoides que permaneceu com membrana viável (13%) e funcional (24,7%) após a descongelação sugere que algumas células podem estar vivas, mas imóveis. Análises utilizando marcadores fluorescentes revelaram que as mitocôndrias dos espermatozoides de tatus são altamente sensíveis ao protocolo de congelação e os achados através da análise ultraestrutural comprovaram esta afirmação. Além disso, as imagens obtidas por microscopia eletrônica de transmissão revelaram que espermatozoides congelados-descongelados apresentaram membranas plasmáticas danificadas, modificações nucleares como alterações na cromatina, e alterações acrossomais relativas à capacitação espermática. Em conclusão, este estudo é a primeira tentativa de criopreservação de sêmen em uma espécie de tatu, e nos auxiliou a identificar pontos críticos no processo de congelação-descongelação, a fim de melhorar o protocolo.(AU)

Morphology and histological annual changes of the oviduct of chaetophractus villosus (Mammalia, Xenarthra, Dasypodidae) / Morfología y cambios histológicos anuales del oviducto de Chaetophractus villosus (Mammalia, Xenarthra, Dasypodidae)

The morphological features of the oviduct in the armadillo Chaetophractus villosus (Desmarest, 1804) were studied. In the simple columnar epithelium, ciliated cells, secretory cells, and cells of the bottom of the folds are described. The most remarkable findings are the increase in number of ciliated cells, when present, from the fimbriae to the uterus, being the isthmus practically lined by ciliated cells, and that secretory cells are more abundant in the apical zone of the ampulla and fimbriae, than in the isthmus. Morphological changes along the year in the different portions are described.

Se estudiaron las características morfológicas del oviducto del armadillo Chaetophractus villosus (Desmarest, 1804). En el epitelio, columnar simple, se describen células ciliadas, secretoras y células del fondo de los pliegues. Las células ciliadas, cuando están presentes, aumentan en número desde las fimbrias hacia el útero, estando el istmo prácticamente tapizado por células ciliadas, las células secretoras son más abundantes en la zona apical de la ampolla y en las fimbrias, que en el istmo. Se describen los cambios morfológicos en las diferentes porciones a lo largo del año.

The spleen of a specialy adapted mammal: the little hairy armadillo Chaetophractus vellerosus, (Xenarthra, dasypodidae): a light and electron microscopic study / El Bazo de un Mamífero con Adaptaciones Especiales: el "Peludo Chico" Chaetophractus vellerosus, (Xenarthra, Dasypodidae). Estudio con Microscopía de Luz y Electrónica

El bazo es un órgano multipotencial y en su microarquitectura se reflejan tanto la filogenia como la adaptación de cada grupo animal e inclusive de cada especie. Los armadillos son un clado antiguo y geográficamente aislado de mamíferos que muestra una mezcla de estructuras ancestrales y modernas. En este trabajo se estudian la microanatomía y citología del bazo del peludo chico Chaetophractus vellerosus. El material se fijó y procesó según las técnicas de rutina de microscopías óptica y electrónica. Los resultados muestran un órgano mediano, del tipo de acumulación, con la típica segregación de pulpas. La pulpa blanca está bien desarrollada pero menos organizada que en otros armadillos. Se observa la presencia de células morfológicamente similares a las foliculares dendríticas y a las interdigitantes, así como agrupamientos de células inmunocompetentes. Estas características apoyan la importancia del órgano en la función inmune. La pulpa roja es un entramado de espacios vasculares y células libres y fijas. Se reconocen, por primera vez en el Género, la presencia de sinusoides esplénicos. El tejido hemopoyético está presente pero menos desarrollado que en otros Euphractini. Se discute la organización y el tamaño del bazo en contextos filogenético y adaptativo.

The spleen is a multifunctional organ. Its microarchitecture reflects so well the phylogeny as the adaptation to niche in each animal group and inclusive in each species. Armadillos, as ancient and isolated mammals, show a mixture of ancestral and modern structures. In this work the microanatomy and cytology of the spleen of the little hairy armadillo Chaetophractus vellerosus was studied. The material was fixed and processed according to the typical methods for light and electron microscopy. Results show a cumulative medium sized spleen with the typical pulps. The white pulp is well developed but less defined than in other armadillos. The presence of follicular-dendritic-like cells and interdigitant dendritic-like cells, as well as clusters of immunocompetent cells agrees with an active immunological activity. The red pulp is a meshwork of circulatory spaces and cells. The presence of splenic sinusoids is recognized for the first time in the genus. Hemopoietic tissue is less developed than in other Euphractini. The microarchitecture and size of the spleen of C. vellerosus is discussed in a phylogenetic and adaptive context.

Nine-banded armadillo and leprosy research.

In this presentation an attempt has been made to describe the nine-banded armadillo as an animal model, probably the only one in which lepromatous leprosy similar to that found in humans can be experimentally produced. Some unique features of the physiology of the animal are mentioned. The pathology and the microbiology of leprosy in the armadillo are described in detail. The discovery of lepromatous leprosy in the wild armadillos in the southern parts of United States, the transmission of disease among them through trauma and thorn pricks and the pathogenesis of the disease are presented. The impact of leprosy in the wild animals may have on human leprosy is discussed.

Electrocardiography in Chaetophractus villosus (Mammalia, Dasypodidae)

O eletrocardiograma do tatu Chaetophractus villosus foi estudado mediante procedimentos eletrocardiográficos de rotina. Os segmentos, intervalos, ondas, ritmos e eixo elétrico médio do ECG foram descritos. Os traçados säo basicamente semelhantes aos de outros mamíferos. Entretanto, foram estabelecidas algumas características diferenciais, como: ausência freqüente das ondas Q e S, baixa ampliaçäo da onda P e grande varibilidade da onda T. Näo existem diferenças significativas entre macho e fêmea para nenhum componente do ECG.